347 rustfrit stål kemisk sammensætning Størrelsen af ​​venøst ​​eller kapillært blod, specifik for SARS-CoV-2, T-celleresponser bestemmer immuniteten over for COVID-19.

Tak fordi du besøgte Nature.com.Du bruger en browserversion med begrænset CSS-understøttelse.For den bedste oplevelse anbefaler vi, at du bruger en opdateret browser (eller deaktiverer kompatibilitetstilstand i Internet Explorer).For at sikre løbende support viser vi desuden siden uden styles og JavaScript.
Sliders, der viser tre artikler pr. slide.Brug tilbage- og næste-knapperne til at flytte gennem diasene, eller dias-controllerknapperne i slutningen til at flytte gennem hvert dias.

347 rustfrit stål kemisk sammensætning

Rustfrit stål 347 spiralrør kemisk sammensætning

Den kemiske sammensætning og mekaniske egenskaber af det rustfri stål 347 spolerør er som følger:
- Kulstof – 0,030% maks
- Chrom – 17-19 %
- Nikkel – 8-10,5 %
- Mangan – 1% maks

Rustfrit stål 347 spolerørs mekaniske egenskaber

Ifølge producenten af ​​rustfrit stål 347 coil tube, mekaniske egenskaber for 347 coil tube:
- Trækstyrke (psi) – 75.000 min
- Udbyttestyrke (psi) – 30.000 min
- Forlængelse (% i 2″) – 25% min
- Brinell hårdhed (BHN) – 170 max

Anvendelser og anvendelser af rustfrit stål 347 spiralrør

• Rustfrit stål 347 spiralrør brugt i sukkermøller.
• Rustfrit stål 347 spiralrør brugt i gødning.
• Rustfrit stål 347 spolerør brugt i industrien.
• Rustfrit stål 347 spiralrør brugt i kraftværker.
• Rustfrit stål 347 spiralrør brugt i fødevarer og mejeri.
• Rustfrit stål 347 spiralrør brugt i olie- og gasanlæg.
• Rustfrit stål 347 Coil Tube Producent brugt i skibsbygningsindustrien.

SARS-CoV-2-specifikke T-celler menes at beskytte mod infektion og progression af COVID-19, men der er ingen direkte beviser for dette.Her sammenlignede vi fuldblodsmålinger af SARS-CoV-2-specifikke interferon-γ positive T-celler med positive COVID-19 diagnostiske testresultater (PCR og/eller lateral flow) inden for 6 måneder efter Lians blodopsamling.Blandt 148 deltagere, der donerede venøse blodprøver, var størrelsen af ​​SARS-CoV-2-specifik T-cellerespons signifikant højere hos dem, der forblev beskyttet, end hos dem, der var inficerede (P < 0,0001).% risiko for infektion, mens høj intensitet reducerede denne risiko til 5,4 %.Disse resultater blev generaliseret til yderligere 299 deltagere, som testede en skalerbar kapillærblodanalyse, der kunne lette adgangen til populationsskala T-celle-immunitetsdata (14,9 % vs. 4,4 %).Målingen af ​​T-celler, der er specifikke for SARS-CoV-2, kan således forudsige risikoen for infektion og bør evalueres ved overvågning af individets og befolkningens immunstatus.
Måling og forståelse af immunresponset på SARS-CoV-2-infektion er vigtigt for at udvikle effektive fremtidige strategier for at minimere folkesundheden og de økonomiske konsekvenser af fremtidige COVID-19-udbrud.Identifikation af immunkorrelater vil give vigtig information om en befolknings modtagelighed for virusinfektion, muligvis tidlig advarsel om maksimale hospitalsindlæggelser, og også give folk mulighed for personligt at styre deres risiko for infektion og risikoen for at inficere andre.Immunovervågning har vist sig at være afgørende for at evaluere effektiviteten af ​​COVID-19-vacciner hos raske og højrisikopatienter1,2,3, især i SARS-CoV-24-mutanter, og påvisningen af ​​immunkompromitterede vil betyde behovet for at øge immuniteten Bliv vaccineret og forebyggelse fremtidige udbrud.
Et individs niveau af immunitet over for SARS-CoV-2-infektion afhænger af flere faktorer: viral belastning på eksponeringstidspunktet, virusvarianter, alder, tidligere vaccinations-/infektionsstatus, komorbiditeter, medicin og vigtigst af alt, anti-SARS-CoV-infektion .2 adaptivt immunrespons opstår på tidspunktet for eksponering for virussen5.Evaluering af immunresponset på SARS-CoV-2-infektion og/eller vaccination har fokuseret på serologiske assays, der måler tilstedeværelsen af ​​antistoffer, der er specifikke for et strukturelt protein (f.eks. spike glycoprotein).Tilstedeværelsen eller fraværet af antistoffer alene bestemmer dog ikke nøjagtigt et beskyttende immunrespons, da responser er væsentligt svækket over tid6 og neutralisering af SARS-CoV-2-varianter hos raske eller dobbeltvaccinerede personer Svag aktivitet, hvilket kan føre til en stor antal gennembrudsinfektioner7.Faktisk faldt beskyttelsen mod symptomatisk COVID-19 forårsaget af Omicron-varianten (B.1.1.529) til omkring 10 % efter kun 4-6 måneders mRNA-vaccination, selvom beskyttelsen mod alvorlig sygdom varede >68 % i mindst 7 måneder8.Måling af adaptive hukommelses-T-celleresponser, som giver langsigtet beskyttelse mod virusinfektion, er den bedste indikator for modtagelighed for SARS-CoV-2-infektion og derfor en bedre indikation af risikoen for at teste positiv for COVID-199, da specifik T celler kan forhindre infektion.uden serokonvertering10,11.Målingen af ​​T-celleresponser har imidlertid fået mindre opmærksomhed på grund af metodiske vanskeligheder og logistiske problemer med at opnå og transportere venøse blodprøver, især når der udføres store observationsundersøgelser for at vurdere vaccinens effektivitet og overvåge immunitet.Imidlertid viser vaccinerede individer robust T-celleaktivitet mod SARS-CoV-2-varianter, hvilket potentielt opvejer tabet af antistofreaktivitet for at begrænse sværhedsgraden af ​​COVID-1912,13.
Her søgte vi at forstå, om en enkelt måling af SARS-CoV-2 T-cellerespons kunne forudsige den absolutte risiko for SARS-CoV-2-infektion inden for 6 måneder efter blodprøvetagning, uanset tidligere immun-påvirkende faktorer.For at gøre T-celletesten høj gennemstrømning og anvendelig til større undersøgelser, forsøgte vi også at gøre testen miniaturiseret, så den kan udføres ved hjælp af en kapillær fingerstiksblodprøve.
Vi målte cellulære og humorale immunresponser hos raske donorer ved hjælp af en kombineret påvisning af SARS-CoV-2 T-celler og IgG-antistoffer baseret på helvenøst ​​blod (for deltagerkarakteristika, se marts 2022 14. Hos vaccinerede donorer, SARS-CoV-2- specifikke T-cellulære responser blev bestemt ved at måle plasma interferon-y (IFN-y)-niveauer efter fuldblodsstimulering med SARS-CoV-2-peptid (som tidligere, ref. 14,15,16,17,18) og IgG-responser forbundet med nukleocapsid (N) var øget hos dem, der rapporterede en tidligere infektion, selvom begge responser var højere hos tidligere inficerede uvaccinerede donorer, maksimalt i kroppen (fig. 1a, b). IgG-responser mod spike glycoproteiner (RBD, S1, S2) var højest hos tidligere inficerede vaccinerede donorer (figur 1c-e).
en SARS-CoV-2-specifik IFN-γ+ T-cellerespons blev målt ved venøs fuldblodsanalyse og baseret på deltagernes vaccinationer og tidligere SARS-CoV-2-infektionsstatus (bekræftet ved PCR og/eller lateral flowtest)' Vac + /Inf +' n = 60 (grøn), 'Vac + /Inf-' n = 82 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 4 (gul), 'Vac-/Inf-' n = 1 (ikke anvendt).SARS-CoV-2-specifikke IgG-bindingsreaktioner er rettet mod nukleocapsid (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), spiked receptor-bindende domæne (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), spidsunderenhed 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) og peak underenhed 2 ("S2") (e) blev målt ved venøse fuldblodsprøver og baseret på deltagervaccination og tidligere SARS -CoV-2 (bekræftet af PCR og/ eller lateral flowtest) infektiøs status.'Vac + /Inf +' n = 60 (grøn), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 4 (gul).Sammenligninger blev foretaget ved hjælp af Kruskal-Wallis-testen, justeret for flere sammenligninger ved hjælp af Dunn-testen.Dataene vises som diagrammer (midterlinje ved median, øvre grænse ved 75. percentil, nedre grænse ved 25. percentil) med knurhår ved minimums- og maksimumværdierne.Hver prik repræsenterer en donor.Rådata leveres i form af rådatafiler.
Efter blodprøvetagning blev deltagerne bedt om selv at rapportere positive PCR- og/eller lateral flow-testresultater for COVID-19;hvis deltagere testede positive mellem 1. september 2021 og 29. december 2021, blev de formodet at være inficeret med Delta (B.1.617.2) variant coronavirus og Omicron (B.1.1.529) til Public Health Wales efter 29. december 2021, da denne mulighed for bekymring bliver dominerende.Blandt 148 evaluerbare donorer observerede vi en infektionsrate på 26,3 % (39/148) inden for 6 måneder efter bloddonation, hvoraf 38 modtog en anden eller tredje dosis af COVID-19-vaccinen (infektionsgennembruddet skete efter Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA-vaccine eller AstraZeneca-vaccine (ChAdOx1 nCoV-19));en uvaccineret donor var også smittet.Størrelsen af ​​SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ-positive T-celleresponser var signifikant lavere hos dem, der rapporterede en positiv diagnostisk test for COVID-19, end hos uinficerede donorer (P < 0,0001; Fig. 2a), primært pga. optimal induktion af T-celleresponser ved vaccination hos nogle deltagere (P = 0,050; Supplerende Fig. 1).Der var ingen korrelation mellem størrelsen af ​​IFN-γ+ T-cellerespons og tiden til et positivt COVID-19-testresultat (Supplerende figur 2).I modsætning hertil var hverken RBD-, S1-, S2-bindende IgG-responser (figur 2b-d) eller RBD-, S1-neutraliserende antistofresponser specifikke for vildtype- eller delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Supplerende Fig. 3) kan skelne mellem personer med risiko for infektion.Imidlertid korrelerede lave N-koblede IgG-responser mod SARS-CoV-2 med risikoen for COVID-19-infektion (P = 0,0084; figur 2e);de, der testede positive, var 85 % mindre sandsynlige (P = 0,00035; ELLER 0,15, 95).% CI: 0,047-0,39 (Supplerende figur 4).
Venøse blodprøver fra raske donorer (n = 148) vurderede SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ+ T-celleresponser (a; ****P < 0,0001) og binding af Spike-receptoren til den specifikke SARS-CoV -2 stimulus.domæne ("RBD") (b), spike 1 underenhed ("S1″) (c), spike 2 underenhed ("S2") (d), og nukleocapsid ("N") (e; **P = 0,0084 ) .Deltagere, der testede positive for COVID-19 (PCR og/eller lateral flow), identificerede;alle infektioner opstod inden for 6 måneder efter blodprøvetagning.Sammenligninger blev foretaget under anvendelse af en to-halet Mann-Whitney test.Dataene vises som diagrammer (midterlinje ved median, øvre grænse ved 75. percentil, nedre grænse ved 25. percentil) med knurhår ved minimums- og maksimumværdierne.Hver prik repræsenterer en donor.ns er ikke vigtigt.Varmekortet f viser Spearmans rang-korrelationer mellem variabler for det angivne datasæt.Sammenligninger, der ikke var statistisk signifikante, blev udelukket fra matrixen og markeret med tomme celler.Rådata leveres i form af rådatafiler.
Den forudindstillede diagnostiske positive cutoff på 14 blev anset for at være for vilkårlig til at vurdere risikoen for geninfektion, så interkvartile intervaller blev etableret for at etablere absolutte risikoparametre.Den statistiske model, som kun inkluderede variabler, der havde en signifikant effekt på resultaterne, viste, at størrelsen af ​​den SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ+ T-cellerespons var den vigtigste immune biomarkør til at bestemme et individs chancer for at blive testet for COVID.-19 positive (figur 2f og supplerende figur 4).Patienter med et SARS-CoV-2-specifikt IFN-γ+ T-cellerespons i den tredje (194-489 pg/ml IFN-γ) og fjerde (>489 pg/ml IFN-γ) kvartil 65 % (P = 0,055; ELLER 0,35, 95 % CI: 0,11–1,00) og 90 % (P = 0,0050; ELLER 0,098, 95 % CI: 0,014–0,42) havde flere deltagere.Chancerne er små (Supplerende Fig. 4).Samlet set havde deltagere med et SARS-CoV-2-specifikt T-cellerespons fra venøst ​​blod ≤79 pg/mL IFN-γ en 43,2 % risiko for gennembrudsinfektion efter 6 måneder sammenlignet med et respons >489 pg/ml.ml IFN-y havde en risiko for infektion på 5,4 % (tabel 2).
Venøs fuldblodsundersøgelse er begrænset i omfang på grund af behovet for prøveudtagning af phlebotomist.For at øge tilgængeligheden af ​​T-celle- og IgG-testning for SARS-CoV-2, er der udviklet en alternativ metode til kapillærblodprøvetagning, som giver deltagerne mulighed for at tage blodprøver fra fingerstik derhjemme.Så vidt vi ved, har der ikke været tidligere rapporter om måling af antigenspecifik T-cellefunktion i kapillære blodprøver.Der er tidligere vist en stærk sammenhæng mellem lymfocyttal opnået ved hjælp af sammenlignelige kapillære og venøse blodprøver.Derudover er det blevet rapporteret, at fuldblodsbaserede assays, der måler SARS-CoV-2-specifikke T-celleresponser, kun bruger 320 μL venøst ​​blod,20, hvilket eliminerer bekymringer om hyppigheden af ​​progenitor-T-celler i kapillære blodprøver.
Vi brugte denne high-throughput standardiserede kollaborative assay af SARS-CoV-2 T-celler og IgG-antistoffer baseret på kapillært fuldblod til at måle cellulært og humoralt immunrespons hos deltagere med forskellige komorbiditeter og tidligere vaccinations-/infektionsstatus (tabel 1).rekrutteret fra hele Storbritannien mellem 24. januar og 14. marts 202214. Størstedelen (90,9 %) af fingerprøverne blev korrekt indhentet og sendt til laboratoriet inden for 24 timer efter indsamlingen.I nogle tilfælde blev prøver modtaget inden for 48 timer efter blodudtagning, men ingen af ​​disse prøver bestod kvalitetskontrol og påvirkede ikke overordnede T-celle- eller antistofmålinger (Supplerende Fig. 5).Selvom der var forskelle i størrelsen af ​​den SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ+ T-cellerespons målt i respektive kapillære og venøse blodprøver hos nogle individer, var der ingen signifikante forskelle generelt (P = 0,88; Supplerende Fig. 6 ).).
SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ+ T-celleresponser var signifikant øget hos vaccinerede individer, som også rapporterede en tidligere infektion (P = 0,0001), men ikke signifikant højere end hos tidligere inficerede uvaccinerede donorindivider (P = 0,19, Fig. 3a).).IgG-responser mod spike glycoprotein (RBD, S1, S2) var signifikant højere hos vaccinerede donorer end hos uvaccinerede donorer, uanset tidligere infektionsstatus (figur 3b-d).Interessant nok var det gennemsnitlige N-bundne IgG-respons højest hos tidligere inficerede uvaccinerede deltagere sammenlignet med vaccinerede deltagere, selvom dette ikke nåede betydning (figur 3e).Blandt uvaccinerede og ikke-inficerede donorer, der selv erklærede, var 15 ud af 37 (40,5%) deltagere positive for N-bundet IgG, over den tidligere etablerede tærskel på 2,0 BAU/mL14;disse 15 deltagere Tolv af disse patienter testede positive for IFN-γ+ T-cellerespons over den tidligere etablerede tærskel på 22,7 pg/mL IFN-γ14.Derfor er det sandsynligt, at disse deltagere tidligere var inficeret med SARS-CoV-2 og ikke blev testet for COVID-19 på grund af personlige valg, mangel på PCR og/eller lateral flow udstyr eller var asymptomatiske.Selvom der var en signifikant korrelation mellem T-celleresponser på IFN-γ+ og N-koblede IgG-niveauer i uvaccinerede donorer (P = 0,0044; Supplerende figur, faldt N-koblet IgG-respons hurtigere end N-koblet IgG-respons, hvorimod IFN-γ + T-celleresponser blev opretholdt uanset vaccinationsstatus, selvom antallet af donorer 50 uger efter udfordring var lavt (Supplerende Fig. 8). Vaccinationstypen var generelt lidt anderledes i observerede IgG-responser, der var specifikke for SARS-CoV-2, T celler og RBD-associerede, selvom deltagere, der modtog to doser BNT162b2 efterfulgt af mRNA1273-revaccination, viste signifikant højere niveauer af IFN-γ + T-celler, var mere følsomme over for SARS-CoV-2 end dem, der modtog to doser af ChAdOx1 og BNT162b2 (Supplerende Fig. 9) Derudover havde rapporterede komorbiditeter ringe overordnet forskel i observerede T-celleresponser sammenlignet med raske donorer (Supplerende Fig. 10).
en SARS-CoV-2-specifik IFN-γ+ T-cellerespons blev målt ved fuldblods kapillaranalyse og var baseret på deltagernes vaccinationer og tidligere SARS-CoV-2-infektionsstatus (bekræftet ved PCR og/eller lateral flowtest).'Vac + /Inf +' n = 42 (grøn), 'Vac + /Inf-' n = 158 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 33 (gul), 'Vac- /Inf-' n = 37 (grå).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2-specifikke IgG-bindingsreaktioner til spidsreceptorbindingsdomænet ("RBD") (b; ****P < 0,0001, ns: ikke signifikant), spidsunderenhed 1 ("S1") (c; * * **P < 0,0001, ns: ikke signifikant), spidsunderenhed 2 ("S2") (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) og nukleocapsid ("N") (e; ****P < 0,0001, ns ikke signifikant) blev målt ved hjælp af venøs fuldblodsanalyse og baseret på deltagernes vaccinationer og tidligere SARS-CoV-2 (bekræftet ved PCR og/eller lateral flowanalyse) Infektioner blev underinddelt i status.'Vac + /Inf +' n = 46 (grøn), 'Vac + /Inf-' n = 182 (blå), 'Vac-/Inf +' n = 34 (gul), 'Vac-/Inf-' n = 37 (grå).Sammenligninger blev foretaget ved hjælp af Kruskal-Wallis-testen, justeret for flere sammenligninger ved hjælp af Dunn-testen.Dataene vises som diagrammer (midterlinje ved median, øvre grænse ved 75. percentil, nedre grænse ved 25. percentil) med knurhår ved minimums- og maksimumværdierne.Hver prik repræsenterer en donor.Rådata leveres i form af rådatafiler.
Som før blev deltagerne bedt om at rapportere positive PCR- og/eller laterale blodgennemstrømningsresultater for COVID-19;ifølge UK Health Agency formodedes deltagerne at være blevet inficeret med Omicron coronavirus (B.1.1.529) på tidspunktet for test af den positive virusvariant, da det var den dominerende variant i Storbritannien i undersøgelsesperioden.Blandt 299 evaluerbare donorer observerede vi en infektionsrate på 8,0 % (24/299) inden for tre måneder efter kapillærdonation, hvoraf syv ikke var vaccineret.Andelen af ​​komorbiditet blandt alle deltagere var lavere hos dem, der testede positive for COVID-19 (10,7 %) end dem, der testede negativ for COVID-19 (24,4 %, tabel 1), hvilket kan skyldes, at deltagere med visse sygdomme er mere forsigtige og beskytter mod potentielle konsekvenser såsom diabetes og kræft.Som observeret i en venøs blodkohorte, SARS-CoV-2-specifikke interferon-γ (IFN-γ)-positive T-celler målt i kapillære blodprøver fra individer, der rapporterede en positiv diagnostisk test for COVID-19.Responsstørrelsen var signifikant lavere end hos uinficerede donorer (P = 0,034; figur 4a) på grund af den relativt dårlige induktion af et T-cellerespons ved vaccination og/eller tidligere infektion (supplerende figur 11).Tilsvarende var hverken RBD-, S1-, S2-bindende IgG-responser (figur 4b-d) eller RBD-, S1-neutraliserende antistofresponser specifikke for vildtype- eller delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Supplerende figur 12).Individer med enhver betydelig risiko for infektion kan identificeres.I modsætning til den venøse kohorte differentierer N-relaterede IgG-responser heller ikke COVID-19-risikoen (figur 4e), hvilket tyder på, at Omicron-varianten (B.1.1.529) øger immunundvigelse hos tidligere inficerede individer, som for nylig beskrevet 21. I modsætning hertil var styrken af ​​den SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ T-cellerespons igen den vigtigste variabel til bestemmelse af individuelle odds for at teste positiv for COVID-19 (figur 4f).Samlet set havde deltagere med et SARS-CoV-2-specifikt kapillært T-cellerespons ≤23,7 pg/mL IFN-γ en 14,9% risiko for infektion efter tre måneder sammenlignet med et respons >141,6 pg/ml.ml IFN.-γ havde en risiko for infektion på 4,4 % (tabel 2).
IFN-γ+ T-celleresponser, der er specifikke for SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) og SARS-CoV-2-specifikke IgG-målrettede receptorbindende domæne (“RBD”) (b), spike-underenhed 1 (' S1′) (c), spidsunderenhed 2 ('S2') (d) og nukleocapsidbindingsreaktion ('N') (e).Deltagere identificeret som positive til COVID-19-test (PCR og/eller lateral blodgennemstrømningstest), alle infektioner opstod inden for 3 måneder efter blodprøvetagning.Sammenligninger blev foretaget under anvendelse af en to-halet Mann-Whitney test.Dataene vises som diagrammer (midterlinje ved median, øvre grænse ved 75. percentil, nedre grænse ved 25. percentil) med knurhår ved minimums- og maksimumværdierne.Hver prik repræsenterer en donor.ns er ikke vigtigt.Varmekortet f viser Spearmans rang-korrelationer mellem variabler for det angivne datasæt.Sammenligninger, der ikke var statistisk signifikante, blev udelukket fra matrixen og markeret med tomme celler.Rådata leveres i form af rådatafiler.
Efterhånden som vi bevæger os ind i næste fase af COVID-19-pandemien, vil fokus skifte fra forebyggelse til individuel risikostyring og identifikation af sårbare medlemmer af samfundet.Etablering af korrelater af immunitet over for COVID-19 er afgørende for effektivt at identificere og behandle disse højrisikogrupper.Der er nu stigende beviser for, at T-celle-immunitet beskytter mod SARS-CoV-2-infektion og begrænser sværhedsgraden af ​​COVID-1910.Dataene præsenteret her viser, at den kombinerede styrke af SARS-CoV-2-specifikke IFN-γ+ T-celleresponser mod spike-, membran- og nukleocapsid-strukturproteiner giver større beskyttelse mod COVID-19 end antistofbinding.19 fremmer eller neutraliserer responser. .og bør tages i betragtning ved vurdering af individuel og/eller besætningsimmunitet.RNA-vira såsom SARS-CoV-2 eller influenza A-virus (IAV) undgår serologisk neutralisering ved hurtigt at udvikle eksponerede B-celleepitoper på overfladeantigener genkendt af antistoffer.Det beskyttende immunrespons, der tilvejebringes af T-celler, kan afspejle målretningen af ​​epitoper fra mere konserverede områder af virale proteiner, som ikke hurtigt kan undslippe et immunrespons.T-cellemedieret beskyttelse mod nye SARS-CoV-2-varianter ligner den heterosubtypiske beskyttelse medieret af T-cellemålretning af konserverede iboende proteiner set i IAV22,23-undertyper.
På trods af det enorme potentiale for måling af det cellulære immunrespons på COVID-19, er der blevet rettet relativt lidt opmærksomhed mod udviklingen af ​​nøjagtige, standardiserede T-celle-assays med høj kapacitet.De traditionelle kompleksiteter og omkostninger forbundet med måling af T-celle-responser udelukker den nøjagtige bestemmelse af T-celle-immunitet ved screening for immunitet med stor population.Mens adskillige kommercielle fuldblodspeptidstimuleringsassays for nylig er blevet tilgængelige, kræver alle i øjeblikket en phlebotomist for at få blod, hvilket begrænser tilgængeligheden og omfanget.Kapillærblodsystemer bruges i vid udstrækning til at bestemme forekomsten af ​​SARS-CoV-2-antistoffer i en population.Vi tilpassede kapillære blodanalyser til at udføre fuldblodspeptidstimuleringsassays for at vurdere T-cellers reaktivitet over for SARS-CoV-2 strukturelle proteiner og SARS-CoV-2-specifikke antistofresponser.Faktisk er den kombinerede måling af SARS-CoV-2-specifikke antistoffer og T-celler i den samme kapillære blodprøve meget attraktiv: (i) reducerer behovet for flere blodprøver pr. deltager, (ii) forbedrer deltagernes oplevelse og forståelse;(iii) forbedre logistikken og reducere dobbeltarbejde, (iv) reducere miljøpåvirkningen, da der kræves færre laboratorieforbrugsvarer og prøvelevering.Selvom den samlede IFN-y-reaktivitet var ens mellem matchede venøse og kapillære blodprøver, blev den observeret at være lavere i den kapillære blodkohorte af deltagere (fig. 4a) sammenlignet med den venøse blodkohorte (fig. 2a).IFN-γ-værdier Der er flere forklaringer på dette fund, nemlig et stort antal deltagere med komorbiditeter, der kræver immunsuppressiv terapi, blev rekrutteret til den kapillære blodprøvekohorte (tabel 1) og levedygtighed og/eller funktion af T-celler opnået fra vaskulære prøver kan være lave, især under hensyntagen til betingelserne for langtidsopbevaring af prøver før peptidstimulering.
Den i øjeblikket bredt tilgængelige COVID-19-vaccine giver den bedste beskyttelse mod alvorlig sygdom for de fleste modtagere inden for 6 måneder efter vaccination8.På trods af den dårlige vaccine-inducerede serologiske neutralisering af SARS-CoV-26,7-varianter forblev T-celleresponser fremkaldt af vaccination mod vildtype SARS-CoV-2 meget reaktive, da 25 andre dukkede op.De data, vi præsenterer her, viser vigtigheden af ​​en bredere vurdering af vaccineimmunogenicitet, der fremhæver vacciner med utilstrækkelig T-celleimmunitet til at forhindre pludselig infektion og vedvarende overførsel af virussen.Vi observerede også, at mange uvaccinerede individer rekrutteret til kapillærkohorten havde et signifikant respons af SARS-CoV-2-specifikke T-celler (og N-bindende IgG) uanset tidligere vaccination, hvilket sandsynligvis skyldes tidligere infektion.I stedet for at vaccinere passende personer, bør deres risiko for infektion vurderes baseret på deres nuværende immuniseringsstatus og de informerede valg, der træffes.
Begrænsninger af denne undersøgelse omfatter forsikringen om, at deltagerne selv rapporterede infektion med SARS-CoV-2 efter blodprøvetagning for at bestemme relevansen af ​​immunitet;nogle deltagere kan have asymptomatisk infektion og er ude af stand til at gennemgå PCR og/eller lateral flow test for COVID-19.Vores datasæt manglede også information om deltagernes medicin på tidspunktet for blodprøvetagning.Da alle vores deltagere kun rapporterede milde/moderate symptomer eller ingen symptomer, var det desuden ikke muligt at identificere immunresponser fra vores datasæt, der forudsagde en øget risiko for alvorlig sygdom og hospitalsindlæggelse for COVID-19.Tilstedeværelsen af ​​CD8+ T-celleresponser mod nukleocapsid-specifikke epitoper er imidlertid for nylig blevet forbundet med beskyttelse mod alvorlig COVID-1926.Derudover målte assayet, der blev brugt her, ikke T-celleresponser på specifikke tidligt udtrykte SARS-CoV-2 ikke-strukturelle proteiner, som for nylig har vist sig at foretrække at akkumulere i seronegative sundhedsarbejdere, der har været i kontakt med inficerede patienter.Baseret på dette arbejde, i betragtning af udbredelsen af ​​samfundsoverførsel på rekrutteringstidspunktet og den høje sandsynlighed for kontaktinfektion i befolkningen, ser antallet af SARS-CoV-2-specifikke T-celler fundet i vores test også ud til at være i stand til at blive ryddet.subkliniske infektioner i vores kohorter.Endelig målte vi ikke interleukin 2-produktion af T-celler, fordi vores tidligere arbejde viste dårlig identifikation af SARS-CoV-214-specifikke T-celle-responser, selvom IL-2-specifikke responser kan indikere allerede eksisterende krydsreaktivitet.celler forbundet med forsvar mod SARS-CoV-211-infektion.
Tilsammen fremhæver disse data det grundlæggende behov for langsigtede longitudinelle undersøgelser, der inkorporerer SARS-CoV-2-specifikke T-celleresponser i mål for immunitet i populationsskala.Disse bestræbelser kan blive hjulpet af udviklingen af ​​en ny kapillær blodprøve, der måler T-cellerespons.
Forskningsprojektet rekrutterede deltagere fra februar 2021 til marts 2022. Kohorten af ​​raske donorer (n = 148), der donerede venøse blodprøver, bestod primært af universitetspersonale og studerende, der deltog i Cardiff Universitys COVID-19-screeningstjeneste eller personale på en folkeskole i Cardiff.Alle deltagere var ellers raske og rapporterede ikke, at de tog nogen immunsuppressiv medicin (se tabel 1 for karakteristika).Kohorten af ​​deltagere, der donerede kapillære blodprøver, inkluderede alle frivillige donorer (i alderen 18+) fra hele Storbritannien.Mellem 24. januar og 14. marts 2022 var 342 deltagere tilmeldt undersøgelsen, hvoraf 299 indsendte blodprøver til laboratoriet.Mange deltagere forblev uvaccinerede og/eller rapporterede om alvorlige komorbiditeter, herunder autoimmune sygdomme og cancer (se tabel 1 for karakteristika).Denne undersøgelse modtog etisk godkendelse fra Newcastle og North Tyneside 2 Research Ethics Committee (ID IRAS: 294246) og Cardiff University School of Medicine Research Ethics Committee (SREC ref: SMREC 21/01).Alle deltagere gav skriftligt informeret samtykke før inklusion.Deltagerne modtog ingen kompensation for at deltage i denne undersøgelse.
Venøse blodprøver blev opnået ved venepunktur i 6 eller 10 ml lithium- eller natriumheparin-vakutainere (BD).Kapillære blodprøver blev taget med en fingerlancet og derefter opsamlet i heparin mikrobeholdere (BD).Der kræves mindst 400 µl blod;enhver prøve mindre end dette beløb vil blive afvist.Andre årsager til prøveafvisning omfattede massiv koagulation og/eller hæmolyse og manglende opsamling af viskøst plasma til analyse (Supplerende Fig. 5).I alt 299 kapillærblodprøver var tilgængelige til vurdering af antistofresponser, hvoraf 270 prøver også var tilgængelige til vurdering af T-celleresponser.
SARS-CoV-2-specifikke T-celleresponser blev vurderet ved hjælp af COVID-19 Immuno-T-assayet (ImmunoServ Ltd) og udført som tidligere beskrevet14.Kort fortalt blev en 6 ml eller 10 ml natriumheparin (BD) venøs vacutainer taget fra hver deltager og behandlet i laboratoriet inden for 12 timer efter blodopsamling.Selvom de fleste prøver blev behandlet inden for 24 timer, blev der udtaget en 400-600 μl hepariniseret mikroblødning (BD) kapillærblod inden for 48 timer efter fingerstikprøvetagning.Venøse og/eller kapillære blodprøver blev stimuleret med separate peptidpuljer, der er specifikke for SARS-CoV-2 (vildtypevariant) som tidligere beskrevet14.Dette peptidbibliotek indeholder 420 15-mer-sekvenser med 11 overlappende aminosyrer, der spænder over hele spidsproteinet (S1 og S2) (S; NCBI-protein: QHD43416 1), nukleocapsid-phosphoprotein (NP; NCBI-protein: QHD43423 2) og membran (Mglycoprotein) ; NCBI protein: QHD43419 1) kodende sekvenser (benævnt "S-/NP-/M-kombinatorisk peptidbibliotek").Alle peptider blev oprenset til >70%, opløst i sterilt vand og brugt i en slutkoncentration på 0,5 μg/ml pr. peptid.Prøver blev inkuberet ved 37°C i 20-24 timer.Rørene blev derefter centrifugeret ved 5000 xg i 3 minutter, og ~150 µl plasma blev opsamlet fra toppen af ​​hver blodprøve.Opbevar plasmaprøver ved -20°C i op til en måned, før der udføres cytokin-/antistofdetektionsassays.
IFN-γ blev målt ved hjælp af IFN-γ ELISA MAX Deluxe-sættet (BioLegend, katalognummer 430116) og udført i henhold til producentens instruktioner.Umiddelbart efter at stopopløsning (2N H2SO4) var tilsat, blev mikropladen aflæst ved 450 nm under anvendelse af en BioLegend Mini ELISA-pladelæser.IFN-y blev kvantificeret ved standardkurveekstrapolation under anvendelse af GraphPad Prism.Værdier under analysens nedre detektionsgrænse blev registreret som 7,8 pg/ml, værdier over assayets øvre detektionsgrænse blev registreret som 1000 pg/ml.
Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG-antistoffer blev målt med et Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex panel (Bio-Rad, kat.nr. 12014634) og mærket iht. producentens instruktioner.instruktioner.Prøver, der rapporterede værdier over grænsen for kvantificering, blev genanalyseret ved en 1:1000 fortynding.Den gennemsnitlige fluorescensintensitet af perlerne blev målt på et Bio-Plex 200 instrument (Bio-Rad).Antistofkoncentrationer blev beregnet ved VIROTROL SARS-CoV-2-enkeltkontrolassay (Bio-Rad) og konverteret til WHO/NIBSC 20/136 International Reference Standard Units (BAU/mL) under anvendelse af producentens kalibreringsfaktor.
RBD- og S1-underenhedsspecifikke neutraliserende antistoffer mod SARS-CoV-2 vildtype og delta (B.1.617) SARS-CoV-2-linjer blev målt ved hjælp af Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio) -Rad , varenr. 12016897), i henhold til producentens anvisninger.Mål den gennemsnitlige fluorescensintensitet på Bio-Plex 200 (Bio-Rad), og beregn den procentvise hæmning (dvs. neutralisering) ved hjælp af følgende formel:
Infektiøse neutraliseringsassays for SARS-CoV-2 blev udført som tidligere beskrevet28.Kort fortalt blev 600 PFU af vildtype SARS-CoV-2 inkuberet med 3-fold serielle fortyndinger af plasma i to eksemplarer i 1 time ved 37°C.Blandingen blev derefter tilsat til VeroE6-celler i 48 timer.Monolag blev fikseret med 4 % paraformaldehyd, permeabiliseret med 0,5 % NP-40 og inkuberet i 1 time i blokeringsbuffer (PBS indeholdende 0,1 % tween og 3 % skummetmælk).Primært antistof (anti-nukleocapsid 1C7, Stratech) blev tilsat til blokeringsbuffer i 1 time ved stuetemperatur.Efter vask blev et sekundært antistof (anti-muse-IgG-HRP, Pierce) tilsat til blokeringsbuffer i 1 time.Monolag blev vasket, udviklet med Sigmafast OPD og aflæst på en Clariostar Omega pladelæser.Brønde uden virus, uden virus, men uden antistoffer, og normaliserede sera, der viste mellemliggende aktivitet, blev inkluderet i hvert forsøg som kontroller.
Statistisk analyse blev udført i GraphPad Prism (version 9.4.1).Normaliteten af ​​datasættet blev testet ved hjælp af Shapiro-Wilk-testen.Ikke-parametriske kriterier blev brugt til alle sammenligninger.Mann-Whitney-testen blev brugt til uparrede prøver.Alle tests var tosidede med en nominel signifikansgrænse på P ≤ 0,05.
Den indledende eksplorative analyse af datasættet blev udført i R (version 4.0.3).Dette omfatter udviklingen af ​​Spearmans univariate rangkorrelationsmatrix, hvor korrelationen mellem to variable er repræsenteret af kvadraternes størrelse og farve.Statistisk signifikans mellem associationer blev beregnet ved hjælp af Spearman's rho, hvor værdier ≤0,05 blev betragtet som signifikante.Sammenligninger, der ikke var statistisk signifikante, blev udelukket fra matrixen og markeret med tomme celler.P-værdier blev justeret for flere sammenligninger ved hjælp af Holms korrektion.En binær logistisk regressionsmodel blev brugt til at simulere effekten af ​​variabler i datasættet på positiv respons på COVID-19.IFN-γ T-celleresponser og anti-RBD/S1/S2/N IgG-titerscores blev konverteret til faktorer, hvor hvert individ blev tildelt den passende kvartil for hver score.Derefter blev der udviklet en indledende forskningsmodel ved hjælp af glm-funktionen i statistikpakken (V4.0.3).Oddsratioerne afledt af denne originale model blev ekstraheret fra koefficienterne for modellen ved hjælp af 'odds_plot'-funktionen i OddsPlotty-pakken (V1.0.2).Når vi udviklede krydsvalideringsmodellen, brugte vi "bestglm"-funktionen fra bestglm-pakken (V0.37.3) for at begrænse brugerbias og sikre, at den bedste delmængde af forudsigere kan vælges.Den valgte metode var "udtømmende", og informationskriteriet, der blev brugt til at vurdere modeltilpasning, var AIC.Den samme arbejdsgang beskrevet ovenfor blev brugt til at opnå odds ratio.
For mere information om undersøgelsesdesign, se Nature study abstract linket til denne artikel.
Breve og anmodninger om materialer skal rettes til Dr. Martin Scarr eller professor Andrew Godkin.Denne artikel indeholder de originale data.
R-koden, der bruges til at skabe statistiske modeller, er offentlig tilgængelig uden anmodning29.Oplysninger om genoptryk og licenser kan findes på www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Sikkerhed og immunogenicitet af syv COVID-19-vacciner som en tredje dosis (booster) efter to doser af ChAdOx1 nCov-19 eller BNT162b2 (COV-BOOST) i Storbritannien: et fase 2, blindet, multicenter, randomiseret, kontrolleret forsøg.Lancet 398, 2258-2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Immunogenicitet, sikkerhed og reaktogenicitet af heterolog primær vaccination mod COVID-19 (Com-COV2) ved hjælp af mRNA, virale vektorer og proteinadjuvansvacciner i Det Forenede Kongerige: en fase 2, enkelt-blind, randomiseret forsøg, non-inferioritetstest.Lancet 399, 36-49 (2022).
Lee, ARIB et al.Effekten af ​​COVID-19-vacciner hos immunkompromitterede patienter: En systematisk gennemgang og meta-analyse.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Nedsat neutralisering af SARS-CoV-2 mikron variant B.1.1.529 med serum efter immunisering.Lancet 399, 234-236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y og Baliser RD Gennembrudsinfektion hos SARS-CoV-2-vaccinerede individer: måling, årsager og konsekvenser.National præst for immunologi.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Svækket immunhumoral respons på BNT162b2 Covid-19-vaccine i 6 måneder.N. eng.J. Medicin.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Aktivitet af rekonvalescent- og vaccinesera mod SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Varighed af beskyttelse af Qatari mRNA-vaccinen mod SARS-CoV-2 Omicron BA.1 og BA.2 subvarianter.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.Hukommelse B-cellefrekvens falder med gennembrudsinfektion af COVID-19 delta-vaccine.Molekylær Medicin EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.Krydsreaktive hukommelses-T-celler er forbundet med at beskytte COVID-19-kontakter mod SARS-CoV-2-infektion.National kommune.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Karakteristiske SARS CoV-2 omicron-reaktive T-celle- og B-celle-responser hos COVID-19-vaccinemodtagere.videnskaben.Immunologi.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Nedarvede SARS-CoV-2-specifikke T-celler krydsgenkender Omicron-varianter.National medicin.28, 472-476 (2022).
Scarr, MJ et al.Måling af SARS-CoV-2-specifikke T-celler fra fuldblod afslører asymptomatisk infektion og vaccineimmunogenicitet hos raske individer og patienter med solid organkræft Immunologi https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Hurtig måling af SARS-CoV-2 spike T-celler i fuldblod fra vaccinerede og naturligt inficerede individer.J. Clinical.investere.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.COVID-19-vaccinerespons hos multipel sklerosepatienter.installere.Neuroner.91, 89-100 (2022).
Bradley RE et al.Vedvarende COVID-19-infektion med Wiskott-Aldrich syndrom forsvandt efter terapeutisk vaccination: en case-rapport.J. Clinical.Immunologi.42, 32-35 (2022).